型 號(hào)
產(chǎn)品時(shí)間2024-12-06
所屬分類大鼠原代細(xì)胞
報(bào)價(jià)2600
大鼠表皮干細(xì)胞
細(xì)胞基本屬性：
產(chǎn)品名稱 | 大鼠表皮干細(xì)胞 | 組織來源 | 皮膚 |
種屬 | 大鼠 | 生長特性 | 貼壁生長 |
形態(tài)特征 | 鋪路石狀細(xì)胞，不規(guī)則 | 英文名稱 | Rat Epidermal Stem Cells |
貨號(hào) | EY-XY3534 | 規(guī)格 | 5x105cells/T25或1mL凍存管 |
質(zhì)量檢測：p63與細(xì)胞角蛋白-14（CK-14）免疫熒光染色為陽性，純度高于 90%，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等
產(chǎn)品規(guī)格：5x105cells/T25或1mL凍存管
培養(yǎng)基：大鼠表皮干細(xì)胞專用培養(yǎng)基
培養(yǎng)條件：氣相：95%空氣+5%二氧化碳；溫度：37℃
換液頻率：每2-3天換液一次
消化液：0.25%
產(chǎn)品貨期現(xiàn)貨，1周左右
運(yùn)輸方式T25培養(yǎng)瓶/ 順豐快遞（包郵）
供應(yīng)限制僅限于科學(xué)研究，絕不可作為動(dòng)物或人類疾病的治療產(chǎn)品使用
背景介紹：
角質(zhì)形成細(xì)胞在基底層有一亞群，即表皮干細(xì)胞，它通過對(duì)稱或不對(duì)稱分裂產(chǎn)生短暫擴(kuò)增細(xì)胞，短暫擴(kuò)增細(xì)胞經(jīng)過幾代擴(kuò)增后便成為終末分化的表皮角質(zhì)細(xì)胞。表皮是一個(gè)可以持續(xù)自我更新的組織，因此表皮干細(xì)胞具有足夠的增殖潛力，表皮干細(xì)胞不僅在體內(nèi)平衡和創(chuàng)傷修復(fù)中其關(guān)鍵作用，而且是腫瘤發(fā)生和基因治療的主要靶標(biāo)。 |
原代細(xì)胞的分離培養(yǎng)：
原代培養(yǎng)即直接從有機(jī)體取下細(xì)胞、組織或器官，讓它們在體外維持與生長。原代培養(yǎng)的特點(diǎn)是細(xì)胞或組織剛離開機(jī)體，它們的生物性狀尚未發(fā)生很大的改變，在一定程度上可反映它們在體內(nèi)的狀態(tài)，表現(xiàn)出來源組織或細(xì)胞的特性， 因此用于藥物實(shí)驗(yàn)，尤其是藥物對(duì)細(xì)胞活動(dòng)、結(jié)構(gòu)、代謝、有無毒性或殺傷作用等，是的工具。常用的原代培養(yǎng)法有組織塊培養(yǎng)法和消化培養(yǎng)法。
（一）組織塊培養(yǎng)法
許多實(shí)驗(yàn)室喜歡用組織塊培養(yǎng)法進(jìn)行原代培養(yǎng)，因?yàn)榉椒ê唵?，?xì)胞也較容易生長。尤其是培養(yǎng)心肌，有時(shí)還可觀察到心肌組織塊搏動(dòng)。細(xì)胞從組織塊邊緣向外長出并鋪滿培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶后， 即可進(jìn)行傳代。
1. 設(shè)備材料
培養(yǎng)箱、冰箱、超凈工作臺(tái)／無菌間、無菌吸管、離心管、酒精燈、試管架、培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)皿、消化液、基礎(chǔ)培養(yǎng)液、胎牛血清、Hanks 溶液、雙抗試液、剪刀、攝子、小燒杯。
2. 操作步驟
（1） 在無菌條件下，取待培養(yǎng)的組織適量，置入小燒杯中， 以適量Hanks 溶液清洗2~3 次，去掉組織塊表面的血污。
（2）用眼科剪將組織塊反復(fù)剪成0.5~ 1mm3的小塊。
（3）再用Hanks 溶液反復(fù)漂洗， 直至液體不混濁為止。等組織塊下沉，將燒杯傾斜，用小吸管盡量吸除Hanks 溶液。
（4）用含20%滅活血清及雙抗溶液(200U/ml、200μg/ml）的培養(yǎng)液再清洗，用吸管吸干后加入5ml 含20％血清的培養(yǎng)液。
（5）用彎頭吸管吸取組織小塊，均勻地置于培養(yǎng)皿內(nèi)表面，吸去多余的培養(yǎng)液，各組織小塊之間相距0.5cm 為宜。蓋好培養(yǎng)皿蓋，做好標(biāo)記， 置37°C 的CO2培養(yǎng)箱內(nèi)。
（6） 2~4h 后，于超凈工作臺(tái)中，緩緩地向培養(yǎng)皿中加入上述含20％血清及雙抗溶液( 100U/ml 及100μg/ml ）的培養(yǎng)液少量，以使組織塊浸沒在培養(yǎng)液中。
（7）輕輕地將培養(yǎng)皿及組織塊移至CO2 培養(yǎng)箱， 如無特殊情況，不必觀察。1~2 周后，可觀察到細(xì)胞從組織塊邊緣長出，形成生長暈。
（9） 一般說來，若培養(yǎng)液無明顯改變， 1 周換液1 次即可。待細(xì)胞長滿整個(gè)培養(yǎng)皿內(nèi)表面，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
操作方法：
組織塊直接培養(yǎng)法（原代細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)）
材料與儀器
【動(dòng)物】選擇大約一半足孕時(shí)間的胚胎，10－13天齡胚胎含有最大數(shù)量的未分化的間質(zhì)細(xì)胞，成纖維細(xì)胞可從這些細(xì)胞衍生獲得。每組小鼠胚胎1個(gè)【實(shí)驗(yàn)材料】每組的超凈臺(tái)中有以下物品：1.50ml配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶；8ml小牛血清（FCS)1瓶；100ml 0.25%瓶；PBS(-)1瓶2.100ml滅菌燒杯2個(gè)；3、50ml離心筒2個(gè)4、滅菌培養(yǎng)皿1個(gè)，細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個(gè)5、1ml，200μl移液器各1支；槍頭盒2個(gè)；無菌玻璃攪拌棒1個(gè)6、細(xì)胞計(jì)數(shù)板1塊；7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把；8、酒精燈1臺(tái)；
步驟
1) 胚胎的分離。適用哺乳動(dòng)物(倉鼠、小鼠和大鼠)2)將1－2個(gè)胚胎轉(zhuǎn)移至一個(gè)小的無菌培養(yǎng)皿中，用新的無菌剪刀小心地絞碎胚胎，用PBS漂洗。3)在無菌狀態(tài)下，將絞碎的胚胎轉(zhuǎn)移于一50ml的無菌離心筒中,加入40ml 0.25％的無菌,用攪拌棒輕輕攪動(dòng)。4)在溫暖的環(huán)境中或置于37°C培養(yǎng)箱中輕輕搖動(dòng)15分鐘。5)讓存留的組織塊在重力作用下慢慢沉降，將含有懸浮細(xì)胞的液體轉(zhuǎn)移至一無菌50ml的離心管中，該管內(nèi)按照每10ml上清加入l ml小牛血清的比例加入牛血清以滅活,。6)加人新鮮溶液(見前述步驟)于含有殘留未消化組織塊的原來的50ml離心筒中，重復(fù)步驟4和5。7)離心混合的細(xì)胞懸液，1200r/rain，5分鐘，棄上清。8)用新鮮的無菌PBS重懸沉淀的細(xì)胞，按步驟7再次離心。9)用PBS反復(fù)洗滌細(xì)胞直至上清清亮為止。
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