商品屬性：
產品名稱 | 重組小鼠/大鼠血管內皮生長因子165 VEGF165 | 英文名稱 | Mouse/Rat VEGF165 protein |
規(guī)格 | 5 μg/20 μg/100 μg/1 mg | 貨號 | EY-01X8692 |
運輸條件 | 藍冰運輸 | 用途 | 僅供科研研究實驗 |
背景：
血管內皮生長因子 165（VEGF165）是一種強效的生長和血管生成細胞因子，屬于 VEGF 家族，包括 VEGF-A、VEGF-B、VEGF-C、VEGF-D、VEGF-E 和 PIGF。VEGF165 是一種豐富的糖基化細胞因子，由兩條相同的 165 個氨基酸鏈組成。VEGF165 在胚胎血管生成、血管生成和神經發(fā)生中發(fā)揮著重要作用。
標記：
1.將細胞培養(yǎng)基與EdU溶液按照500：1的比例混合，制成2×EdU標記培養(yǎng)基。
2.提前將2×EdU標記培養(yǎng)基預熱，然后將150微升2×EdU標記培養(yǎng)基與等體積細胞培養(yǎng)基混合，獲得1×EdU溶液。
【注】：①不建議替換全部培養(yǎng)基，這樣可能會影響細胞增殖的速度。②配置好的培養(yǎng)基建議現用現配，用量以沒過細胞為宜。
3.孵育細胞2 h，棄培養(yǎng)基。
【注】：①培養(yǎng)時間取決于細胞的增殖速度和生長狀態(tài)。②大多數腫瘤細胞以及粘附細胞系均可采用2 h的孵育時間。
4.以1xPBS清洗細胞兩次，每次5 min, 以除去未摻入DNA的EdU殘留。
【注】：對于貼壁不牢的細胞可降低清洗強度。
實驗步驟：
1. 將細胞以 104-105 個細胞/孔的密度接種在 96 孔板 中，加入 100μL 培養(yǎng)基，含或不含待測化合物。在 CO2 培養(yǎng)箱中在 37℃ 下培養(yǎng)細胞 24 小時。
2. 向板中加入 10μL 不同濃度的待測物質。
3. 在培養(yǎng)箱中將培養(yǎng)板培養(yǎng)適當時間（如 6、12、24 或 48 小時）。
4. 向板的每個孔中加入 10μL CCK-8 溶液。小心不要將氣泡引入孔中。
5. 將平板在培養(yǎng)箱中孵育 1-4 小時。
6. 在讀板之前，在定軌振蕩器上輕輕混勻。
7. 使用酶標儀測量 450nm 處的吸光度。
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