型 號(hào)
產(chǎn)品時(shí)間2024-11-22
所屬分類三羧酸循環(huán)系列
報(bào)價(jià)300
產(chǎn)品名稱：線粒體蘋果酸脫氫酶（MDHm）生化檢測(cè)試劑盒
規(guī)格：100管/96樣 50管/48樣
貨號(hào) : EY-01S1148
測(cè)試方法:微量法 紫外分光光度法
分類：三羧酸循環(huán)系列
測(cè)定意義：
MDH （EC 1.1.1.37）廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，線粒體中MDH是TCA循環(huán)的關(guān)鍵酶之一，催化蘋果酸形成草酰乙酸；相反，胞漿中MDH催化草酰乙酸形成蘋果酸。草酰乙酸是重要的中間產(chǎn)物， 連接多條重要的代謝途徑。因此，MDH在細(xì)胞多種生理活動(dòng)中扮演著重要的角色，包括線粒體的能量代謝、 蘋果酸-天冬氨酸穿梭系統(tǒng)、活性氧代謝和抗病性等。根據(jù)不同的輔酶特異性，MDH分為NAD-依賴的MDH和NADP-依賴的MDH，細(xì)菌中通常只含有NAD-MDH，在真核細(xì)胞中，NAD-MDH分布于細(xì)胞質(zhì)和線粒體中。
測(cè)定原理：
MDHm催化NADH還原草酰乙酸生成蘋果酸，導(dǎo)致340nm處光吸收下降。
需自備的儀器和用品：
紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板和蒸餾水。
試劑一：液體×1瓶，室溫保存。
試劑二：液體×1瓶，4℃保存。
試劑三：粉劑×2瓶，－20℃保存。臨用前加入22mL試劑二，現(xiàn)配現(xiàn)用。
試劑四：液體×1支，4℃保存。
1、組織：按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL試劑一）進(jìn)行冰浴勻漿。16000g，4℃離心20min，取上清置冰上待測(cè)。
2、細(xì)菌、真菌：按照細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：試劑一體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬(wàn)細(xì)胞加入1mL試劑一），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時(shí)間3min）；16000g， 4℃離心20min，取上清液置冰上待測(cè)。
3、血清等液體：直接測(cè)定。
（1）按照蛋白濃度計(jì)算
活性單位定義：25℃中每毫克蛋白每分鐘氧化1nmol NADH 為1個(gè)酶活單位。
ADH (nmol/min/mg prot) =(△A÷ε÷d×V反總×109) ÷(Cpr×V樣)÷T
=1608×△÷Cpr
（2）按照樣本質(zhì)量計(jì)算
活性單位定義：25℃中每克組織每分鐘氧化1nmol NADH 為1個(gè)酶活單位。
ADH (nmol/min/g鮮重) =(△A÷ε÷d×V反總×109) ÷(W×V樣÷V樣總)÷T
=1608×△A÷W
（3）按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算
活性單位定義：25℃中每104個(gè)細(xì)胞每分鐘氧化1nmol NADH 為1個(gè)酶活單位。
ADH (nmol/min/104cell) =(△A÷ε÷d×V反總×109)÷(細(xì)胞數(shù)量×V樣÷V樣總)÷T
=1608×△A ÷細(xì)胞數(shù)量
（4）按液體體積計(jì)算
活性單位定義：25℃中每毫升血清每分鐘氧化1nmol NADH 為1個(gè)酶活單位。
ADH (nmol/min/mL) =(△A÷ε÷d×V反總×109) ÷V樣÷T
=1608×△A
ε：NADH摩爾消光系數(shù)，6.22×103L/mol/cm；d：比色皿光徑，1 cm；V反總：反應(yīng)體系總體積，1000μL=0.001 L；Cpr：上清液蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；V樣：加入反應(yīng)體系中上清液體積，100μL=0.1 mL；T：反應(yīng)時(shí)間，1min。
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