1. 標準品的稀釋與加樣：在酶標包被板上設標準品孔10孔，在di一、第二孔中分別加標準品100μl，然后在di一、第二孔中加標準品稀釋液50μl，混勻；然后從di一孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl，混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉，再各取50μl分別取50μl分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl，混勻后從第七、第八孔中加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul，混勻；混勻后從第五、第六孔中各分別取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl，混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。（稀釋后各孔加樣量都為50μl，濃度分別為180 ng/L，120 ng/L ，60 ng/L，30 ng/，15 ng/L）。
2. 加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4. 配液：將30（48T的20倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水30（48T的20倍）倍稀釋后備用。
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。
7. 溫育：操作同3。
8. 洗滌：操作同5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
11. 測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后15分鐘。
二磷酸腺苷核糖基轉移酶4抗體ART4 0.2ml
AKIRIN2蛋白抗體AKIRIN2 0.2ml
ADP核糖基化樣因子8B抗體ARL8B 0.2ml
三磷酸腺苷酶家族蛋白2抗體ATAD2 0.2ml
AKIRIN1蛋白抗體AKIRIN1 0.1ml
錨定蛋白樣蛋白1抗體ASZ1 0.2ml
腺苷酸激酶2抗體Adenylate kinase 2 0.2ml
精子頂體前體蛋白抗體Acrosin 0.2ml
黑色素瘤缺失樣蛋白1抗體AIM1L 0.2ml
未知糖基化轉移酶AER61抗體AER61 0.2ml
鐵蛋白Fe65抗體FE65 0.1ml
抑癌基因ras同源家族1抗體ARHI 0.2ml
轉錄激活蛋白2α/TFAP2α/AP-2α抗體AP2 alpha 0.1ml
心鈉素抗體ANP 0.1ml
丙氨酰tRNA合成酶2抗體AARS2 0.2ml
絲氨酸抑制蛋白激酶C底物抗體AKAP12 0.1ml
核突觸蛋白α抗體Alpha-Synuclein 0.1ml
自噬相關蛋白4B抗體APG4B 0.2ml
整合素樣金屬蛋白酶與凝血酶1型-12抗體ADAMTS12 0.2ml
α-輔肌動蛋白4(內參)抗體alpha Actinin 4-Loading Control 0.1ml
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